煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是細胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔因子。 NADH是NAD +的還原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通過酯鍵將磷酸基團添加到腺苷核苷酸的2'位置。 NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作為還原劑。 在葉綠體中，NADP是在光合作用的初步反應(yīng)中重要的氧化劑。 通過光合作用產(chǎn)生的NADPH用作卡爾文光合作用循環(huán)中生物合成反應(yīng)的還原能力。

傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測定通過監(jiān)測340nm處NADH或NADPH吸收的變化來進行。 Amplite?熒光總NAD和NADH檢測試劑盒為敏感檢測NAD和NADH提供了一種便捷的方法。 系統(tǒng)中的酶特異性識別酶循環(huán)反應(yīng)中的NAD / NADH，其顯著提高了檢測靈敏度。 此外，該測定具有非常低的背景，因為其在紅色可見范圍內(nèi)運行，這顯著降低了生物樣品引起的干擾。

概述

準備NAD / NADH反應(yīng)混合物（50μL）

添加NADH標準品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育15分鐘--2小時

監(jiān)測Ex / Em = 540 / 590nm處的熒光強度